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今天是：歡迎光臨【中北國技】,愿與您共譜我國技術轉(zhuǎn)移事業(yè)和高新技術產(chǎn)業(yè)的新華章,！
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今天是：歡迎光臨【中北國技】,愿與您共譜我國技術轉(zhuǎn)移事業(yè)和高新技術產(chǎn)業(yè)的新華章！
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今天是：歡迎光臨【中北國技】,愿與您共譜我國技術轉(zhuǎn)移事業(yè)和高新技術產(chǎn)業(yè)的新華章,！
| 項目簡介： 經(jīng)過多年的潛心研究,，目前成功開發(fā)了一整套能高效表達外源基因的漢遜酵母表達系統(tǒng),，以及適用于不同基因表達的受體菌，使一些較難表達的基因在其表達平臺中獲得較好的表達,，建立了一整套從表達載體構(gòu)建到產(chǎn)業(yè)化發(fā)酵和蛋白純化的通用技術平臺,。 該系統(tǒng)可以以多種不同的碳源（甲醇、葡萄糖,、甘油）進行誘導發(fā)酵,，并可在貧氧狀態(tài)下正常表達外源蛋白，解決了生產(chǎn)中使用純氧造成的安全性問題,，表達產(chǎn)物易于純化（His-tag標記）,，表達量高。創(chuàng)建的表達平臺己申請專利,，使生產(chǎn)單位的知識產(chǎn)權得到保護,。 項目現(xiàn)狀： 目前該項目組開發(fā)的高效表達外源基因的漢遜酵母表達系統(tǒng)包括19個表達載體，可根據(jù)外源基因的種類不同,，每升發(fā)酵液的表達量可達0.1—10 g,，適合大、中,、小規(guī)模的企業(yè)選用,。獲得專利5項，建立了一整套從表達載體構(gòu)建到產(chǎn)業(yè)化發(fā)酵和蛋白純化的通用技術平臺,。 （一）重組外源蛋白工業(yè)化生產(chǎn)技術平臺 項目組采用目前為止外源真核基因表達量最高的漢遜酵母系統(tǒng)表達了乙肝表面抗原,、pre-S1-S、pre-S2-S,、pre-S1S2-S,、治療性乙肝疫苗、人乳頭狀瘤病毒L1蛋白、HIV七肽重復區(qū),、狂犬病毒G蛋白,、霍亂毒素無毒亞單位、mVP1-CTB,、,、牛促卵泡激素、a干擾素,、粒細胞/巨噬細胞集落刺激因子,、木薯醇晴酶、菊酸乙酯酯酶等基因,。采用多拷貝胞內(nèi)表達和分泌表達等不同的表達方式,。發(fā)酵誘導后，收獲菌體或者表達上清液,，經(jīng)純化后可獲得（純度>98%）具有生物學活性的外源蛋白,。項目組可提供穩(wěn)定高效表達的工程菌和發(fā)酵條件以及參考的提取工藝。 （二）粘膜免疫技術平臺 CTB為His-tag標記的霍亂毒素B亞單位,，它是迄今為止最強的胃腸道免疫原,，能和哺乳動物細胞腸上皮細胞上的GM1結(jié)合后，刺激粘膜產(chǎn)生以分泌型IgA為主的保護性抗體,，構(gòu)建了粘膜疫苗平臺,，以CTB為基礎加上不同的抗原表位構(gòu)成粘膜免疫疫苗。該項目組利用已經(jīng)建立的Hansenula polymorpha表達系統(tǒng)中的pHFMDHZ-α-A分泌型表達載體,，表達了mVP1-CTB,。其中mVP1為口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因上的第21-40，135-160,，200-213氨基酸,，通過人工合成拼接而成，該基因含有T,、B細胞表位,，能刺激產(chǎn)生保護性T細胞免疫和體液免疫。表達產(chǎn)物免疫Balb/c小鼠后,，能產(chǎn)生高效價的IgG（1：10000）和IgA（1：1000）抗體,。并能保護Balb/c小鼠和豬對105 LD50劑量的FMDV-O-type的攻擊。建立了Hansenula polymorpha-粘膜免疫技術平臺,。該平臺用于預防所有通過粘膜和呼吸系統(tǒng)感染的疾病,。其中口蹄疫Hansenula polymorpha酵母粘膜免疫技術已經(jīng)完全成熟,可以直接進行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。此平臺可用于口服或粘膜免疫疫苗的研發(fā),。 （三）漢遜酵母糖基修飾人源化表達平臺 在哺乳動物細胞中表達基因工程藥物,，具有生產(chǎn)成本高,、周期長、易于污染人源性致病因子等缺點,。因此,，對酵母宿主菌的糖基化進行人源化改造，使其完全按照人體內(nèi)蛋白進行糖基化修飾,，將是高新醫(yī)藥領域的一次重大變革,。由于該技術是一項平臺型技術體系，可以應用于所有治療性重組蛋白,，包括重組抗體,。而對于目前的重組抗體，即便是嵌合抗體也有較大的免疫問題,，使其成為治療性抗體的一個瓶頸,，因此如果在酵母體內(nèi)解決人源性問題,，將帶來重組抗體技術的重大突破,。目前國外最近已經(jīng)完成了畢氏酵母表達人源化抗體的實驗室工作，推測1—2年后會出現(xiàn)商品化產(chǎn)品,。漢遜酵母人源糖基化問題有望給我國生物技術制藥帶來新的契機,。此項研究正在進行，并取得了實質(zhì)性進展,，有望在近期內(nèi)完成受體改造,，表達出人源糖基化蛋白。 （四）高效篩選平臺 由于漢遜酵母隨機重組率很高,，篩選穩(wěn)定高表達克隆工作量很大,。我們構(gòu)建了目的基因和篩選基因共表達體系，可以直觀篩選高表達株,，減少了篩選工作量,，縮短篩選周期，可快速高效獲得高表達株,。 應用領域： 此平臺可廣泛用于生物醫(yī)藥,、食品工業(yè)、飼料工業(yè),、精細化工,、化裝品等重組蛋白制品。 |
