一,、項(xiàng)目成熟階段：成熟期
二,、概況
外源的重組蛋白質(zhì)在細(xì)菌中大量表達(dá)時(shí)，往往會形成不可溶,、無生物活性的蛋白質(zhì)聚集體,，稱為包涵體。由于細(xì)胞中缺乏幫助折疊的催化劑,，使得高濃度的新生蛋白質(zhì)來不及形成正確的折疊,，暴露的疏水區(qū)相互作用而聚集,。目前上市的重組蛋白藥物中，54%是以大腸桿菌作為表達(dá)系統(tǒng),，而大腸桿菌中有一半形成包涵體,。和可溶形式的蛋白質(zhì)產(chǎn)物相比，包涵體具有很多優(yōu)勢,，包括目標(biāo)蛋白質(zhì)純度高,，能夠抵抗蛋白質(zhì)酶的攻擊，對宿主細(xì)胞的毒性小,，易于純化以及在純化過程中不用考慮蛋白質(zhì)失活等,。許多膜蛋白在表達(dá)過程中，因?yàn)楹茈y確定重組蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的位置,，所以形成包涵體對后續(xù)操作非常有利,。由包涵體形式存在的重組蛋白質(zhì)的后處理過程包括菌體發(fā)酵，細(xì)胞破碎,，包涵體回收,，洗滌，變性溶解,，復(fù)性以及最終產(chǎn)品的純化等步驟,。其中將溶解的包涵體進(jìn)行復(fù)性是最為關(guān)鍵的一步，復(fù)性率通常只有5%-20%,。因此如何獲得高的復(fù)性收率一直是基因工程下游技術(shù)的研究熱點(diǎn),。
三、技術(shù)特點(diǎn)
本項(xiàng)目建立的新型固相輔助重組蛋白質(zhì)折疊技術(shù)通過層析介質(zhì)的介入,，阻隔了蛋白分子之間的相互作用,，降低了聚集體的形成?？煽朔鹘y(tǒng)稀釋復(fù)性率低,，體積大等的缺點(diǎn)，不僅可在較高濃度下進(jìn)行蛋白質(zhì)的重折疊,，而且復(fù)性的同時(shí)可實(shí)現(xiàn)雜蛋白以及不同折疊結(jié)構(gòu)的分離,。已建立包括凝膠過濾、離子交換,、疏水層析等多種介質(zhì)的固相輔助復(fù)性以及單梯度,、雙梯度、三梯度等多種復(fù)性工藝,。
四,、應(yīng)用情況
成功應(yīng)用于溶菌酶、干擾素,、粒細(xì)胞集落刺激因子,、CD147、抗凝溶栓雙功能HV12p-rPA融合蛋白等包涵體蛋白質(zhì)的重折疊過程,，復(fù)性效果遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)復(fù)性方法,。
五、合作方式
合作開發(fā),、技術(shù)咨詢,、技術(shù)服務(wù)或技術(shù)轉(zhuǎn)讓。
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